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小鼠卵母细胞孤雌激活(PA)

体外受精技术资料 2021-01-14

 小鼠卵母细胞孤雌激活(PA)    参考(Tan Jin-He et al,2008)

方案一:

6-8周龄雌鼠腹腔(IP)注射10IU PMSG(适宜时间:6-7pm

↓48h later

腹腔(IP)注射10IU HCG

18h

雌鼠颈椎脱臼致死,75%酒精消毒背部,从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的CZB-H

在体视镜下用1ml注射器(1号针头)将输卵管刺破,释放出COCs

用移卵针将COCs置于50ul 0.1Hya 消化去除卵丘细胞

MII期卵母细胞移入Ca2+-free CZB中洗涤几次

MII期卵母细胞在激活液[Ca2+-free CZB+ SrCL2(10 m M/L)+CB(5μg/ml)]中激活2.5h

倒置显微镜观察卵母细胞是否激活,1PN2PN表明成功激活

激活后的卵母细胞在平衡过的KSOMCZB培养液中洗涤3次,转移至KSOMCZB液滴开始IVC

观察,记录胚胎体外发育情况

  

方案二:

6-8周龄雌鼠腹腔(IP)注射10IU PMSG(适宜时间:6-7pm

↓48h later

腹腔(IP)注射10IU HCG

13h

雌鼠颈椎脱臼致死,75%酒精消毒背部,从背部剪下两侧卵巢及输卵管迅速置于预热的CZB-H

在体视镜下用1ml注射器(1号针头)将输卵管刺破,释放出COCs

用移卵针将COCs置于50ul 0.1Hya 消化去除卵丘细胞

MII期卵母细胞移入Ca2+-free CZB中洗涤几次

MII期卵母细胞在激活液[Ca2+-free CZB+ SrCL2(10 m M/L)+CB(5μg/ml)]中激活2.5h

紧接着在CZB+2 mM /L 6-DMAP培养3.5h

倒置显微镜观察卵母细胞是否激活,1PN2PN表明成功激活

激活后的卵母细胞在平衡过的KSOMCZB培养液中洗涤3次,转移至KSOMCZB液滴开始IVC

观察,记录胚胎体外发育情况