●清洗：将在4%多聚甲醛中固定的卵巢组织取出，用PBS清洗1h，洗去渗入卵巢的多聚甲醛。
●脱水：卵巢组织经梯度乙醇脱水，梯度乙醇均为新鲜配制，梯度浓度依次为50% 、70% 、85% 、95% 、95%、无水乙醇、无水乙醇，每步均为1h。
●透明：将脱水后组织放入无水乙醇和二甲苯混合液（体积比1:1）中1h，然后投入二甲苯中浸泡，二甲苯浸泡时间根据卵巢透明效果而定，一般为20min。
●浸蜡：将卵巢依次投入二甲苯和石蜡混合液（体积比1:1）、石蜡I、石蜡II、石蜡III中各1h。
●包埋：将液体石蜡倒入包埋盒中，迅速将卵巢放入，并调整卵巢的方向和位置，室温冷却。
●切片：将蜡块进行修整。准备好切片用的毛笔、染色架和防脱载玻片等。将旋转切片机厚度调整到 5 µm 左右进行连续切片。
●展片：用眼科镊夹取切好的蜡带，轻轻平铺放置于展片器的水面上，水温调整在45℃。当组织自然平整地展开时，用载玻片插入水面将组织捞出粘附于玻片上。
●烤片：将展好的片子晾干后放置到烤片机上烤干，时间是30min，烤片机的温度为50℃。
●脱蜡和染色：将切片依次放入二甲苯、二甲苯、二甲苯乙醇混合液、乙醇、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇中各3min，持续水流冲洗10s，切片放入苏木精中染色20min后持续水流冲洗15分钟直至切片变蓝。
●分化和漂洗：将切片放入1%盐酸乙醇中数秒，直至切片变红，立即放入持续水流中使其恢复蓝色。
●脱水和复染：切片依次放入50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇中各3min，用伊红染色液染1min。
●脱水和透明：将切片放入95%乙醇中清洗1min，放入无水乙醇中5min，晾干后放入二甲苯I、二甲苯II中各5min。
●封片：用中性树胶封片，置于切片盒中保存。
●在倒置显微镜下对整个卵巢连续切片中的各级卵泡进行计数。各级卵泡分类见下图，为了避免重复计数同一卵泡，只计数可见卵母细胞核的卵泡。
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