在辅助生殖与发育生物学研究中，超数排卵（superovulation）是获取高质量卵母细胞的关键技术。小鼠超数排卵推荐每只雌鼠注射PMSG 5-10 IU，48 h后注射HCG 5-10 IU，在注射HCG后14-16 h进行受精^[1]。然而，PMSG与HCG的“48小时定律”背后，隐藏着卵泡同步化与卵母细胞成熟的精密时钟。

为什么进行促排？

小鼠自然发情仅释放10–15枚卵子。通过外源激素干预，可突破这一限制：首先PMSG（孕马血清促性腺激素）模拟FSH效应，同步募集并激活大量原始卵泡，使其发育至有腔阶段，此时的卵母细胞仍停滞于第一次减数分裂双线期（GV期）；间隔48 h后给予HCG（人绒毛膜促性腺激素），模拟LH峰，诱导GV期卵母细胞恢复减数分裂，排出第一极体并停滞于第二次减数分裂中期（MII）。最终，在输卵管壶腹部聚集大量同质化的MII期卵子，为体外受精和后续胚胎操作提供充足且高质量的材料。

为什么间隔48小时？

PMSG通过模拟FSH，需44-48小时募集足够数量的小卵泡并使其同步发育至排卵前阶段。George^[2]研究发现，将PMSG-HCG间隔从48小时延长至60小时，并未提升小鼠见栓率与受精率（Table 1.）；与此同时，延长注射时间也未能协助胚胎克服2-细胞阻滞（Table 2.）。这一结果提示，48小时可能是卵泡群同步化与卵母细胞核成熟的“黄金窗口”。

HCG后14-16小时：MII期的“保鲜期”

注射HCG模拟LH峰后，卵母细胞恢复减数分裂，经历生发泡破裂（GVBD），最终在12-14小时内完成第一次减数分裂并排出第一极体，达到MII，此时方具备受精能力（Figure 1.）。取卵时机必须精准契合此成熟窗口：过早取卵（如HCG后<12小时）可能获得大量停滞在GV期或MI期的未成熟卵母细胞，无法受精；而过晚取卵（如HCG后>16小时），卵母细胞则开始进入老化阶段，表现为皮质颗粒提前释放、纺锤体结构异常等，从而导致受精率下降或胚胎发育潜能受损。因此，HCG后14-16小时是获取成熟MII期卵母细胞并进行受精的理想时间窗。

技术细节：

• 激素保存：PMSG与HCG均为糖蛋白，反复冻融会导致空间结构变性。建议单次分装-20℃保存，避免活性损失。

• 取卵时机：HCG注射后14-16小时后取卵，可最大化获取输卵管壶腹部成熟卵母细胞。

研究启示

George等的数据警示我们：在超数排卵方案中，时间间隔并非“越长越好”。延长激素间隔可能扰乱卵泡微环境，最终损害胚胎基因组激活。未来需结合单卵母细胞转录组与实时成像技术，解析48小时定律的分子计时器。48小时，是进化赋予小鼠的生殖节拍器；14-16小时，是卵母细胞等待精子的终极倒计时。精准把握每一小时，才能让每一次超排成为“质量”而非“数量”的胜利。

参考文献

1. [1] Behringer R, Gertsenstein M, Nagy KV, Nagy A. Administration of Gonadotropins for Superovulation in Mice. Cold Spring Harb Protoc. 2018 Jan 2;2018(1). doi: 10.1101/pdb.prot 092403. PMID: 29295897.
2. [2] George MA. An analysis of the effect of the PMSG-HCG interval on the two-cell block. Hum Reprod. 1988 Feb; 3(2):249-50. doi: 10.1093/oxfordjournals.humrep.a136687. PMID: 3356781.
3. [3] Sun, Hongzheng et al. "The global phosphorylation landscape of mouse oocytes during meiotic maturation." The EMBO journal vol. 43, 20 (2024): 4752-4785. doi:10.1038/s44318-024-00222-1.