卵子质量是IVF实验成败的关键因素之一。卵母细胞体外成熟（IVM）技术无需依赖小鼠体内激素高峰，可稳定获取大量MII期卵母细胞。其核心是从小鼠卵巢获取未成熟GV期卵丘-卵母细胞复合体（COCs），置于模拟体内微环境的IVM培养液中，37℃、5% CO₂培养16–18小时，使其发育为排出第一极体（PBI）的 MII 期成熟卵母细胞，可用于后续IVF、ICSI。本文结合实操经验整理全流程指南，提升实验成功率。

一、小鼠准备与激素处理

• 供体可选用3 周龄以上小鼠，腹腔注射 10 IU PMSG（爱贝# M2620）后 46~48 h取卵，即可获得 GV 期卵母细胞。

• 特定实验：需排除激素影响时，直接从未经处理的小鼠卵巢取卵，卵母细胞数量略少。

二、卵母细胞获取（核心：轻、快、稳）

1. 处死小鼠后，取出双侧卵巢，立即放入预热后的M2（爱贝# M1250）培养液中，避免暴露空气过久。

2. 在M2中剥去卵巢囊，用 1mL 注射器针头或尖镊轻柔刺破卵巢表面卵泡，释放卵泡液及 COCs，体视镜下挑选形态完整、卵丘致密的健康 COCs。

三、体外成熟培养（细节决定成熟率）

1. 提前准备IVM（爱贝# M2115）培养液滴（50-100 μL/滴），覆盖胚胎培养用矿物油（爱贝# M2460）防蒸发，放入37℃、5% CO₂、饱和湿度培养箱预热4 h以上。

2. 将挑选后的COCs移入IVM培养液中润洗2-3遍，之后移入IVM培养液滴。每滴培养液放入10-15枚COCs，37℃、5% CO₂培养箱中培养16-18小时，培养期间减少开箱次数，避免环境波动影响成熟率。

四、成熟判定与后续处理

COCs培养16-18小时后，

1. 如需观察裸卵相关检测指标（如观察第一极体排出率、ICSI），可使用透明质酸酶（爱贝# M2215）消化卵丘细胞， 体视显微镜下观察。

2. 如需进行IVF实验，可使用口吸管或微量移液器轻柔吸取 COCs，转移至HTF培养液中清洗 2–3 次，洗去残留培养液与杂质，再转移到新的HTF受精滴中。清洗以及转移全程动作轻柔，避免剧烈吹打或挤压卵丘。

五、注意事项

• 无菌操作：实验器械与实验环境注意保持无菌操作，培养液浑浊即丢弃，杜绝污染。

• 温度控制：全程维持37℃，可使用显微镜透明热台（爱贝# ABHOT01）对实验材料进行预稳，并减少培养箱开关次数。

• 刺破卵泡、转移及吹打 COCs 时力度要轻，避免损伤卵母细胞与卵丘结构。

• 取卵、洗卵用 M2 培养液，卵母细胞成熟培养使用 IVM 培养液，请按阶段区别使用。

• 规范记录：详细记录小鼠信息、操作时间、成熟率等关键实验信息。