小鼠卵母细胞IVM：COC体系与裸卵体系怎么选？

开展小鼠卵母细胞体外成熟实验，后续发育不理想的关键往往不是培养时长，而是培养体系选择：COC 需要保留完整卵丘结构，搭配 IVM 培养液，裸卵则采用 M16 基础培养基。本文系统整理两套体系的取材、培养条件与操作规范，为小鼠卵母细胞 IVM 实验提供稳定可重复的实操方案。

1. 卵母细胞取材方法

1.1 卵丘-卵母细胞复合体（COC）取材

卵丘-卵母细胞复合体外层包裹完整卵丘颗粒细胞，颗粒细胞与卵母细胞形成缝隙连接，可为卵母细胞提供能量代谢底物、抗氧化保护及成熟信号调控，保障卵母细胞核质同步成熟。

1. 超排处理后的小鼠脱颈处死，无菌解剖摘取双侧卵巢，剔除卵巢表面脂肪与结缔组织，置于37 ℃预热的M2操作液中清洗两次。

2. 体视显微镜下采用1ml注射器穿刺卵巢表面卵泡，轻柔挤压释放卵泡内容物，收集成团的卵丘-卵母细胞复合体。

3. 筛选生发泡完整、胞质均匀透亮、卵丘颗粒细胞层致密包裹、形态完好的GV期COC，剔除颗粒细胞脱落、卵子皱缩、胞质异常的不合格样本。

4. 筛选完成后用M2培养液（#M1250）清洗2–3次，去除残留卵泡液与组织碎屑，转入IVM培养液（#M2115）中培养。

1.2 裸卵（DO）取材

裸卵为无卵丘颗粒细胞包裹的GV期卵母细胞，适用于卵母细胞自主代谢、应激损伤及颗粒细胞功能缺失相关机制研究。

1. 小鼠处死后无菌分离双侧卵巢，去除外周多余脂肪与结缔组织，移入37 ℃预热的M2操作液中。利用无菌显微刀片充分剁碎卵巢组织，破碎卵泡结构，释放卵泡内的裸卵。

2. 体视显微镜下筛选形态完整、胞质均匀、生发泡清晰、无颗粒细胞附着的优质GV期裸卵，舍弃畸形、胞质碎裂、胞质发黑的异常卵子。

3. 合格裸卵经M2操作液充分漂洗3次，彻底清除组织碎屑与杂质，转入已平衡好的M16培养液（#M1735）中培养。

4. 培养2–4 h统计GVBD发生率；培养12–14 h统计第一极体排出（PBE）成熟率。

2. 体外成熟培养体系

2.1 IVM培养体系（COC专用）

IVM培养液的设计逻辑是模拟卵泡微环境，常通过添加FSH、EGF、丙酮酸等促成熟因子、能量底物与蛋白支持，来支持卵丘扩张和卵母细胞核质同步成熟。实际配方、浓度与是否添加血清/替代蛋白，应结合物种、小鼠周龄、激素处理方案与实验终点预实验确定。

2.2 M16培养体系（裸卵专用）

M16属经典碳酸氢盐缓冲培养液，以丙酮酸、乳酸为核心能量底物，适配裸卵无颗粒细胞辅助、完全自主代谢的生理特征，可稳定维持裸卵体外存活与基础生理活性，适用于各类基础机制研究。

M16 可作为小鼠卵母细胞体外成熟的基础培养基，能支持部分卵母细胞完成生发泡破裂并排出第一极体；但它不能完全替代卵丘细胞提供的旁分泌信号和卵丘-卵母细胞间缝隙连接支持。排出第一极体只是核成熟标志，代表恢复减数分裂并到达 MII，不等同于胞质成熟完整。与卵丘-卵母细胞复合体相比，经 M16 等基础培养基完成核成熟的裸卵，其胞质成熟和后续发育潜力通常较低，常规 IVF 受精效率也较差，因此通常不建议直接用于常规 IVF。

3. 操作规范与注意事项

（1）充分平衡：IVM 培养液与 M16 均为碳酸氢盐体系，培养液滴须覆油后置于37 ℃、5% CO₂饱和湿度培养箱中过夜平衡（时长≥4 h），平衡完成后方可用于细胞培养，避免pH波动造成成熟不同步、卵母细胞退化或活性降低。

（2）油封液滴：所有培养液滴必须覆盖无菌石蜡油，主要用于减少蒸发、稳定渗透压并降低培养过程中的污染风险。

（3）恒温快操作：全程使用37 ℃预温缓冲操作液完成分离、清洗与筛选，缩短卵子离体应激时间，尽可能保障卵母细胞活性。

无论是COC专用IVM培养体系，还是裸卵专用M16培养体系，可靠的实验结果，源于体系稳定性；而稳定的背后，是一整套试剂标准的建立 —— 爱贝生物深耕小鼠胚胎工程与生殖生物学试剂领域，围绕卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎冷冻等研究方向打造全品类产品线，为研究者打通取材培养胚胎评估的完整实验链路。